Este documento apresenta um estudo inovador que concebe e valida INGUBAL Lechero para Ruminantes^® como um pós-biótico para tratar a mastite na criação de ovelhas leiteiras. O desenho do estudo incluiu a caraterização de estirpes bacterianas patogénicas e benéficas, destacando a seleção de bactérias lácticas com propriedades antimicrobianas e imunomoduladoras. A formulação do pós-biótico INGUBAL Leite de Ruminantes^® proveniente da fermentação de três estirpes bacterianas da coleção BAL-INGULATES foi apresentado como alimento suplementar, incluindo subprodutos do metabolismo bacteriano e células microbianas inanimadas. Durante o período de suplementação, foi observada uma redução significativa de 16,77% na contagem de células somáticas, indicando uma melhoria na saúde mamária e na qualidade do leite. A presença da bactéria patogénica S. aureus foi completamente eliminada após 60 dias de administração, sendo uma causa frequente de mastite subclínica que afecta a produção de leite. Para além disso, a capacidade do pós-biótico INGUBAL Leite de Ruminantes^® para modular a microbiota intestinal, sugerindo uma abordagem abrangente e sustentável para o tratamento e a prevenção da mastite na criação de gado leiteiro. Estes resultados oferecem perspectivas promissoras para alternativas mais eficazes e amigas do ambiente na gestão da saúde mamária na criação de gado leiteiro. INTRODUÇÃO O termo mastite pode ser definido como um processo de inflamação dos tecidos da glândula mamária, que pode afetar tanto a qualidade como a quantidade da produção de leite. Esta patologia, quando de origem infecciosa, é causada por diversos agentes patogénicos que invadem o úbere, dando origem a uma série de problemas sanitários nas explorações de ruminantes leiteiros, que têm um grande impacto económico, causando maiores perdas do que o resto das patologias existentes no conjunto da exploração. Bactérias como Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli e outros microrganismos estão entre os agentes patogénicos mais frequentes que desempenham um papel proeminente no desenvolvimento da mastite. Dada a grande variedade de aspectos que podem caraterizar a mastite, foram formuladas diferentes categorias para abordar esta condição. Centrando-nos nos sinais clínicos que os animais afectados podem apresentar, encontramos:

• Mastite subclínica: trata-se de processos em que a inflamação no úbere não manifesta sinais clínicos evidentes a olho nu. A única manifestação observável reflecte-se num aumento da contagem de células somáticas no leite e numa diminuição da produção de leite.
• Mastite clínica: refere-se à mastite que provoca sinais clínicos visíveis, tanto a nível local, especificamente no úbere, como por vezes a nível sistémico, como febre ou falta de apetite. Em função da evolução do processo, pode distinguir-se entre mastite aguda, subaguda e crónica.

Ao lidar com a mastite de origem infecciosa, é essencial concentrar-se no tratamento dos animais afectados e na aplicação de medidas preventivas para evitar a ocorrência da doença. Historicamente, tanto o tratamento como a prevenção têm-se baseado na utilização de antibióticos, quer sistémicos quer intramamários, tanto nos animais afectados como nos animais em risco, como medida preventiva. No entanto, o uso indiscriminado de antibióticos ao longo do tempo levou ao aparecimento de resistência bacteriana, ameaçando a eficácia destes medicamentos e colocando riscos para a saúde pública. Por conseguinte, a necessidade de otimizar a utilização de antibióticos exige uma evolução destas práticas tradicionais, bem como a procura de alternativas mais sustentáveis. Neste sentido, os pós-bióticos surgem como uma alternativa promissora no tratamento e prevenção da mastite. Os pós-bióticos são preparações de microrganismos benéficos inanimados e metabolitos resultantes da sua fermentação que têm efeitos positivos na saúde devido às suas propriedades antimicrobianas e imunomoduladoras. Os pós-bióticos podem atuar modulando o microbiota intestinal e há cada vez mais provas científicas do impacto que isto pode ter no microbiota mamário. Além disso, ao modular a resposta inflamatória a nível sistémico, os pós-bióticos não só combatem a infeção atual, como também ajudam a prevenir futuros episódios de mastite. Ao contrário dos antibióticos tradicionais, INGUBAL Ruminant ^Lechero® oferece uma opção mais sustentável, reduzindo o risco de resistência bacteriana e minimizando os impactos ambientais. O seu foco na saúde a longo prazo representa um avanço significativo na gestão sustentável da saúde mamária na produção leiteira. MÉTODO 1. conceção do produto: seleção de bactérias benéficas O primeiro passo na conceção de um pós-biótico é a caraterização das estirpes bacterianas, tanto patogénicas como benéficas. A conceção do produto é uma combinação de uma história clínica completa com um diagnóstico veterinário minucioso e testes microbiológicos in vitro para estirpes que produzem moléculas com propriedades antimicrobianas e imunomoduladoras.

1.1. Isolamento de agentes patogénicos

Os dados foram recolhidos dos registos médicos de uma exploração ovina leiteira de Lacaune e foi isolado o microrganismo Staphylococcus aureus, uma bactéria Gram-positiva que causa mastite nas fêmeas.

1.2. Seleção de bactérias benéficas

A INGULADOS dispõe de uma coleção de estirpes bacterianas que foram isoladas de animais em excecional estado de saúde e que têm a capacidade de produzir substâncias antimicrobianas e imunomoduladoras. Com base nos nossos resultados anteriores, fizemos uma seleção de bactérias lácticas com a capacidade de inibir o crescimento de S. aureus e que também possuem moléculas que regulam a resposta inflamatória a nível sistémico.

2. Desenvolvimento de produtos: fabrico e validação

2.1. Fabrico do produto

Com base na caraterização microbiológica e na informação obtida nas fases anteriores, foi selecionada uma combinação de bactérias e respectivos metabolitos para produzir o produto final destinado a promover o controlo da mastite. A fermentação foi realizada em condições óptimas para cada estirpe escolhida para produzir a quantidade máxima de metabolitos antimicrobianos e moléculas imunomoduladoras.

O produto final foi denominado INGUBAL Ruminant ^Lechero® e é um alimento complementar constituído por um pós-biótico que inclui os subprodutos do metabolismo das bactérias benéficas, bem como as próprias células microbianas inanimadas.

2.2. Validação do produto

A última etapa para validar a eficácia do produto foi realizada numa exploração com 840 ovelhas leiteiras da raça Lacaune, onde o INGUBAL Ruminant ^Lechero® foi adicionado à alimentação das mães numa concentração de 0,2% (2 kg por Tn de alimentação) durante todo o período de ordenha.

Os dados de produtividade do gado foram recolhidos através da contagem de células somáticas por mililitro, e os resultados foram comparados com os dados obtidos no mesmo período em anos anteriores e foi realizado um estudo microbiológico para detetar a presença de S. aureus antes e depois da suplementação.

RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados obtidos no estudo fornecem provas promissoras da eficácia do pós-biótico INGUBAL Ruminant ^Lechero® no controlo da mastite em ovelhas leiteiras Lacaune. Foram colhidas 82 amostras de leite durante o período de suplementação e o número médio de células somáticas foi de 933 celsx1000/mL ± 129,55. Este valor foi comparado com o mesmo período do ano anterior (1121 ± 138,97 celsx1000/mL, n=82), obtendo-se diferenças estatisticamente significativas (teste t: <0,0001) com uma redução de 16,77%. A redução significativa da contagem de células somáticas durante o período de suplementação indica uma melhoria na saúde mamária das ovelhas, o que se traduz diretamente numa maior qualidade do leite produzido. Este resultado é particularmente relevante, uma vez que a mastite subclínica, mesmo sem sinais clínicos evidentes, afecta negativamente a produção de leite.

Figura 1 – Resultados da contagem de células somáticas nos períodos de suplementação.

Bactérias S. aureus foi detectada em 50% das amostras antes da suplementação, com uma concentração média de 1,21-104 Unidades Formadoras de Colónias por mililitro (ufc/mL). Desde 60 dias após o início da administração de INGUBAL Ruminant ^Lechero® até ao final do estudo, não foi detectada a presença da bactéria patogénica em nenhuma das amostras. Esta percentagem de redução de 100% sugere uma ação eficaz do pós-biótico na inibição desta bactéria Gram-positiva causadora de mastites. Este resultado é particularmente notável dada a importância do S. aureus na geração de mastites e o seu impacto negativo na produção e qualidade do leite. Embora esteja por vezes associada a infecções subclínicas, tem um impacto importante na produtividade e na qualidade do leite, aumentando a contagem de células somáticas.

Figura 2 – Isolamento e identificação de Staphylococcus aureus no leite

Metabolitos e moléculas antimicrobianas produzidas pelas bactérias benéficas no ambiente pós-biótico INGUBAL Ruminante ^Lechero® incluem bacteriocinas, ácidos orgânicos e outros, e têm demonstrado ter efeitos positivos no microbiota intestinal, promovendo um ambiente mais equilibrado e resistente aos agentes patogénicos. A modulação da microbiota intestinal pode ter repercussões diretas na microbiota mamária, pois acredita-se que existe uma comunicação bidirecional entre estes dois ecossistemas, conhecida como eixo intestinal-mamário, e é um fenómeno emergente na investigação sobre a saúde mamária em ruminantes leiteiros. Por outro lado, a melhoria da saúde intestinal pode contribuir para reforçar as defesas do sistema imunitário a nível sistémico, o que, juntamente com as moléculas imunomoduladoras contidas no produto, pode reduzir a predisposição para infecções mamárias. CONCLUSÕES As mastites são processos inflamatórios do úbere que se acompanham de uma alteração quantitativa e qualitativa da produção de leite. Estas patologias são de grande importância nas explorações leiteiras, causando maiores perdas do que o resto das patologias no seu conjunto. A bactéria Staphylococcus aureus é a causadora da mastite contagiosa em ovinos num grande número de casos, provocando uma infeção aguda, embora em muitos casos se detecte a presença de infecções subclínicas sem sintomas. INGUBAL Ruminant ^Lechero® foi especificamente concebido para ajudar a controlar a mastite causada por S. aureus, porque contém estirpes bacterianas com a capacidade de inibir o crescimento da bactéria patogénica, bem como elementos imunomoduladores que ajudam a controlar a inflamação. INGUBAL Ruminant ^Lechero® é um pós-biótico inovador fabricado por INGULATES que contém três bactérias inanimadas da coleção BAL-INGULADOS, além dos seus metabolitos antimicrobianos e imunomoduladores. A administração de INGUBAL Ruminant Lechero^® durante o período de ordenha é uma estratégia acessível e sustentável que pode melhorar a qualidade do leite e ajudar a prevenir complicações associadas à mastite de origem infecciosa, especialmente a mastite subclínica. REFERÊNCIAS

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