Este estudo analisou o efeito da suplementação com o pós-biótico ^PORCIBAL® durante a gestação e lactação de porcas ibéricas, assim como nos seus leitões durante a primeira semana de vida. Os resultados obtidos demonstram que estes produtos são uma ferramenta interessante que permite melhorar os índices sanitários e zootécnicos nestas fases de produção. Entre os resultados mais relevantes, destaca-se a melhoria dos índices produtivos, especialmente a partir da primeira semana de vida, bem como a redução do aparecimento de diarreias e do uso de antibióticos.

INTRODUÇÃO

Existe um interesse crescente na prevenção de doenças através da obtenção de um bom nível de imunidade e saúde digestiva. Existem inúmeras linhas de investigação que visam desenvolver melhores estratégias de imunomodulação nutricional, a fim de melhorar a saúde animal e, consequentemente, os parâmetros zootécnicos.
A microbiota intestinal do leitão é estabelecida alguns dias após o nascimento (alguns autores sugerem 48 horas após o nascimento) e a sua composição depende de factores como os microrganismos no canal de parto, o contacto com as fezes maternas ou o contacto com a pele do úbere após as primeiras mamadas de colostro (Nowland et al., 2019). A limpeza do ambiente em que as porcas são mantidas durante a gestação (principalmente no último terço) e a lactação também desempenha um papel importante na formação desta microbiota intestinal (Law et al., 2021).
Esta colonização microbiana do intestino nas primeiras horas de vida influencia diretamente a fisiologia e o desenvolvimento do hospedeiro, moldando o seu fenótipo (Everaert et al., 2017) e desempenha um papel essencial na modulação do trato gastrointestinal imaturo para gerar sistemas funcionalmente eficientes quando o animal é adulto.
Portanto, do ponto de vista prático, podemos dizer que a fase neonatal, e mesmo o pré-parto em porcas reprodutoras, podem ser os momentos mais eficientes para influenciar a microbiota, estabelecendo benefícios mais robustos e duradouros nos leitões.
Uma das estratégias mais populares atualmente é a utilização de pós-bióticos, que podem ser definidos como moléculas ou compostos de produtos bacterianos não viáveis que possuem propriedades bioactivas. Mas o que é que sabemos sobre o papel dos pós-bióticos na saúde intestinal dos leitões?

OBJECTIVO

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração de produtos pós-bióticos a leitões (Duroc x Iberian), tanto na alimentação das mães(INGUBAL ^Swine®) durante a gestação-lactação como diretamente por via oral(^PORCIBAL®) aos leitões na primeira semana de vida, sobre diferentes parâmetros de saúde e produção.

MATERIAL E MÉTODOS

Animais e conceção experimental

Este estudo é uma continuação do trabalho publicado no número 002 da revista Tierra porcino (García-Jiménez et al., 2023), no qual se observou uma redução da mortalidade neonatal dos leitões de mães suplementadas com o pós-biótico INGUBAL ^Swine®.
A experiência foi realizada numa exploração comercial de porcos ibéricos situada em Mérida (Badajoz). O estudo utilizou 56 porcas ibéricas desmamadas aos 28 dias pós-parto e inseminadas artificialmente (IA) aos 3 dias pós-desmame. Após um diagnóstico de gestação positivo (35 dias após a IA), foram constituídos dois grupos com base nos dois tipos de alimentação pré-parto e de lactação. O grupo controlo ou ração convencional (CM) formado por 28 porcas e o grupo pós-biótico (PM) formado por outras 28 porcas que foram suplementadas com o pós-biótico INGUBAL ^Swine® (2 kg/tn) incorporado na ração convencional. A ração suplementada com o pós-biótico começou a ser utilizada após a confirmação da gestação e foi mantida durante todo o pré-parto (86 dias) e até ao final da lactação (28 dias), com um total de 104 dias de consumo.
Nesta parte do estudo centrámo-nos principalmente na monitorização e análise de diferentes índices de produção e parâmetros de saúde registados durante a fase de lactação dos leitões obtidos das porcas selecionadas. Foram utilizados 197 leitões, distribuídos em 4 grupos experimentais de acordo com o tratamento recebido pelas mães e pelos próprios leitões. Os grupos experimentais foram distribuídos como mostra a Tabela 1.

Três dias após o nascimento, cada leitão foi identificado individualmente (aproveitando a aplicação de ferro). Os leitões pertencentes ao grupo de controlo (CL) foram identificados com marcas auriculares azuis numeradas e os pertencentes ao grupo pós-biótico (PL) com marcas auriculares amarelas numeradas. De cada ninhada, os dois maiores machos foram selecionados e colocados num grupo (amarelo vs. azul). Estes animais foram selecionados como controlos para a recolha de amostras sanitárias (como se explica mais adiante). Os restantes leitões de cada ninhada foram identificados aleatoriamente com marcas auriculares azuis ou amarelas.
Os tratamentos foram aplicados em duas fases. Uma primeira aplicação de 1 ml de ^PORCIBAL® por via oral durante o primeiro manuseamento (3 dias de vida) e 4 dias depois foram administrados 2 ml de ^PORCIBAL® por via oral aos mesmos animais. Os leitões do grupo de controlo (marcas auriculares azuis) receberam as mesmas doses, mas neste caso em água esterilizada, para simular o stress do manuseamento dos animais. A aplicação foi efectuada através de seringas automatizadas com cânula oral adaptada à espécie.
O maneio durante a lactação foi o habitual para este sistema de produção, com um lactoiniciador ^(Babigol®) disponível ad libitum a partir do 5º dia de vida, e uma ração pré-desmame ^(Babipres®) a partir de 7 dias antes do desmame.
Os tratamentos sanitários dos leitões foram os habituais nestes sistemas de produção de suínos ibéricos: aplicação de complexo férrico injetável (3 dias de vida) e vacina comercial contra E. coli (18 dias de vida).

Animais e conceção experimental

Para os índices de produção, o peso individual de cada leitão foi registado em três momentos: ao nascimento, a uma semana de vida e ao desmame. Com estes valores foi possível calcular o ganho médio diário durante toda a lactação (GDA) e em duas fases, desde o nascimento até à primeira semana de vida (GDA-1) e desde a primeira semana de vida até ao desmame (GDA-2). Para esta análise, foi tido em conta o sexo dos leitões.
As perdas de leitões durante todo o período de lactação foram também monitorizadas a nível individual, classificando este parâmetro em 3 intervalos, de acordo com a idade dos leitões. Os leitões com menos de 2 dias de idade (nascidos fracos), os leitões de 2 a 8 dias de idade e os leitões com mais de 8 dias de idade. Além disso, avalia a ocorrência de diarreia na ninhada e o uso de antibióticos.

Índices hematológicos de saúde

Para a análise dos biomarcadores de saúde, foram selecionados 14 leitões de controlo de cada grupo experimental. As amostras de sangue total e de soro foram obtidas por punção do seio cavernoso e recolhidas em tubos com EDTA para análise hematológica e em tubos com ativador da coagulação para a determinação dos parâmetros bioquímicos. As amostras foram transportadas a 4°C e mantidas refrigeradas até o processamento no laboratório, onde o soro foi obtido por centrifugação a 3000 rpm.
Foram efectuados hemogramas com um analisador hematológico(Celltac α MEK-6550, Nihon Kohden) para determinar a contagem de glóbulos vermelhos (contagem de glóbulos vermelhos, hemoglobina e hematócrito) e a contagem de glóbulos brancos (contagem de leucócitos, linfócitos, neutrófilos e eosinófilos).
Além disso, foi utilizado um analisador automático de química clínica(Biosystem A15) para determinar o perfil proteico (proteínas totais, albumina e ureia) e outros parâmetros de perfil geral, como a fosfatase alcalina (ALP) e a desidrogenase láctica (LDH).

Caracterização dos factores de patogenicidade de isolados de Escherichia coli

Foi realizada a caraterização por PCR (Zhang et al., 2007) dos factores de patogenicidade dos isolados de Escherichia coli(E. coli) obtidos por esfregaço rectal dos 14 leitões de controlo pertencentes a cada grupo experimental. As zaragatoas foram colhidas na primeira manipulação (3 dias de idade) e no desmame (28 dias de idade).

Análise estatística

O GraphPad Prism 8.0.2 foi utilizado para o tratamento estatístico dos dados individuais obtidos e para estabelecer o efeito dos pós-bióticos utilizados sobre os diferentes parâmetros estudados. As diferenças foram consideradas significativas com P< 0 ,05.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Análise dos índices produtivos

A tabela seguinte mostra a evolução do GMD nas diferentes fases (GMD1 e GMD2), para os 4 grupos experimentais e de acordo com o sexo dos animais.

Em relação à evolução dos ganhos médios diários, observou-se uma queda do GMD2 em relação ao GMD1 nos leitões (machos e fêmeas) de matrizes que não consumiram pós-biótico durante a gestação e lactação (Figuras A e B). No entanto, esta queda foi menos acentuada nos leitões que receberam ^PORCIBAL® durante a primeira semana de vida, especialmente no caso das fêmeas (Figura B).

Nos grupos experimentais em que as matrizes foram suplementadas com INGUBAL ^Swine® (2 kg/tn) durante a gestação e lactação, foram observadas melhores taxas de crescimento na segunda fase (GMD2), como pode ser observado nos gráficos C e D.

Observou ainda que o GMD2 era mais elevado para os leitões que também foram suplementados com ^PORCIBAL® quando comparados com os leitões que não o receberam, nomeadamente 6% mais elevado para os machos e 13% mais elevado para as fêmeas.
Foi demonstrada a influência direta do microbioma intestinal da porca na composição do microbioma colostral e do leite (Chen et al., 2018). Portanto, podemos deduzir que as intervenções que modificam positivamente o microbioma intestinal da porca terão efeitos positivos no microbioma intestinal e na saúde intestinal do leitão.

Incidentes durante a lactação

No que se refere às incidências durante a lactação, verificou-se uma taxa 20% mais elevada de esmagamento dos leitões no grupo de controlo em comparação com o grupo pós-biótico. Este parâmetro estaria relacionado com a maior mortalidade de leitões com menos de 2 dias de idade observada no grupo de controlo e poderia ser um reflexo de uma maior percentagem de leitões nascidos fracos neste grupo. A tabela seguinte (Tabela 3) mostra os animais (%) com incidências nos dois grupos.

Relativamente à incidência de diarreia e, por conseguinte, à aplicação de antibióticos, ambos os parâmetros foram ligeiramente inferiores nos leitões de mães suplementadas com o pós-biótico.

Indicadores de saúde hematológicos

A análise dos biomarcadores hematológicos foi efectuada em 14 leitões de controlo selecionados de cada grupo. A tabela seguinte (Tabela 4) mostra os valores médios de cada parâmetro hemático nos animais dos 4 grupos no final da experiência.

Observa-se que a maioria dos valores se encontra dentro dos limites normais para as espécies nos quatro grupos experimentais (Khan, 2008), o que indica a segurança alimentar dos aditivos utilizados.
Apenas foram detectados valores acima dos limites normais para o hematócrito, sendo especialmente elevados no grupo CM-CL(p< 0,05) e que podem estar relacionados com um certo nível de desidratação. Os glóbulos brancos estavam dentro dos valores normais, embora se tenha observado um valor mais elevado no grupo CM-PL. Destacam-se também os níveis mais elevados de linfócitos nos grupos PM-CL e PM-PL, o que poderá estar relacionado com uma possível melhor resposta celular nestes animais.
Relativamente aos parâmetros bioquímicos, verificou-se que a maioria dos valores se encontra dentro dos intervalos de referência para a espécie. A tabela seguinte (Tabela 5) apresenta os valores médios de cada parâmetro bioquímico sanguíneo nos animais dos quatro grupos de alimentação no final da experiência.

Apenas os valores de LDH acima do intervalo nos animais dos quatro grupos são dignos de nota, não tendo sido observadas diferenças estatisticamente significativas entre eles.

Caracterização dos factores de patogenicidade de isolados de Escherichia coli

Não foram detectados factores de patogenicidade em nenhum dos isolados de E. coli obtidos nos quatro grupos experimentais na amostragem realizada 3 dias após o nascimento. Em contrapartida, quase 100% dos leitões amostrados apresentavam algum fator de patogenicidade nos seus isolados de E. coli ao desmame. A tabela seguinte mostra a proporção de isolados de E. coli e os respectivos factores de patogenicidade (Tabela 6).

Para que um isolado de E. coli tenha a capacidade de causar diarreia em leitões, considera-se necessário que tenha tanto fímbrias de adesão como enterotoxinas entre os seus factores de patogenicidade (Pérez et al., 2016). Em nosso estudo, todos os isolados encontrados nas células com fundo vermelho apresentaram essa capacidade. Em relação aos grupos experimentais, 53,6% dos leitões das matrizes que não receberam o pós-biótico apresentaram a capacidade de causar diarreia em comparação com 17,8% dos leitões no caso das matrizes suplementadas. Este resultado está diretamente relacionado com a maior taxa de diarreia e com o maior uso de antibióticos nos leitões das mães não suplementadas.

CONCLUSÕES

A utilização do pós-biótico INGUBAL ^Swine® durante a gestação e lactação das porcas ibéricas, assim como do ^PORCIBAL® nos leitões durante a primeira semana de vida, demonstrou ser uma ferramenta interessante que permite melhorar os índices sanitários e zootécnicos nesta fase de produção. A melhoria dos índices produtivos, especialmente a partir da primeira semana de vida, em leitões de mães suplementadas com o pós-biótico (+13%GMD, -20% esmagamento), bem como a redução do aparecimento de diarreia (-3%) e o uso de antibióticos (-7,5% ATB). Tudo isto se basearia na ação dos pós-bióticos utilizados para melhorar a saúde intestinal.

OBRIGADOSO

Os autores gostariam de agradecer a Anabel Moreno(Veterinaria-Grupo Solano) e a todo o pessoal da quinta que participou na experiência (Moisés, José, Javi, Alicia e Juan) pela sua inestimável colaboração.

REFERÊNCIAS

• Nowland, T. L. et al (2019). Desenvolvimento e função do microbioma intestinal e potenciais implicações para a produção de suínos. Animais 9, 1-15.
• Law, et al. (2021). A desinfeção dos ambientes maternos está associada à composição do microbioma dos leitões desde o nascimento até o desmame. MSphere 6 (5): e0066321. https://doi.org/10.1128/mSphere.00663-21.
• Everaert, N. et al (2017). Uma revisão sobre maturação intestinal precoce e colonização em suínos, incluindo fatores biológicos e dietéticos que afetam a homeostase intestinal. Anim. Feed Sci. Technol. 233, 89-103.
• García-Jiménez, W.L et al (2023). Redução da mortalidade neonatal de leitões em porcas ibéricas suplementadas com pós-bióticos. Tierras porcino 002.
• Zhang, W. et al (2007). Prevalência de genes de virulência em estirpes de Escherichia coli recentemente isoladas de suínos jovens com diarreia nos EUA. Veterinary Microbiology 123, 145-152.
• Chen, Wei et al (2018). Dependência do estágio de lactação da microbiota do leite de porca. Fronteiras em Microbiologia 9.
• Khan, C.M. (2008). Manual Veterinário Merck. Sexta edição.
• Pérez, L. et al (2016). Diarreia pós-desmame, prevalência de Escherichia coli em Espanha. Porcinews, abril 2016 pp. 43-52.